GMP潔凈區(qū)沉降菌測試方法及測試記錄表
1.目的：GMP潔凈區(qū)沉降菌測試方法及測試記錄表 闡述潔凈室空氣中沉降菌檢測操作規(guī)程，保證藥品質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境對產(chǎn)品的污染。
2.范圍：適用于本公司潔凈區(qū)(室)的沉降菌的監(jiān)測。
3.責任：沉降菌檢測員。
4.內(nèi)容：GMP潔凈區(qū)沉降菌測試方法及測試記錄表
4.1基本概念：
4.1.1菌落:細菌培養(yǎng)后,由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落,簡稱CFU.通常用個數(shù)表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空氣中的活性微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。
4.1.3沉降菌菌落數(shù):規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以個/皿表示。
4.2測試原理:本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。
4.3測試方法：
4.3.1使用的儀器設(shè)備和培養(yǎng)基:
高壓消毒鍋:使用時應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程進行。
恒溫培養(yǎng)箱:必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。
培養(yǎng)皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min。
培養(yǎng)基:胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基。
將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2-8℃的壞境中存放。
4.3.2測試時間:
對單向流，如A級凈化房間內(nèi)及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10分鐘后開始。
對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘開始。
4.3.3采樣點數(shù)目及其布置:
采樣點數(shù)目下限值:沉降菌的采樣點數(shù)下限值可按表1確定。在滿足蕞少測點數(shù)的同時，不宜滿足蕞少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2
表1 采樣點數(shù)下限值
面積（m2） | 潔凈度等級 | ||
A、B級 | C級 | D級 | |
＜10 | 2-3 | 2 | 2 |
≥10-＜20 | 4 | 2 | 2 |
≥20-＜40 | 8 | 2 | 2 |
≥40-＜100 | 16 | 4 | 2 |
≥100-＜200 | 40 | 10 | 3 |
注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風面積，對于非單向流潔凈室，指的是房間面積。 | |||
表2 培養(yǎng)皿數(shù)下限值
潔凈度等級 | 所需φ90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降4h計） |
A | 14 |
B | 2 |
C | 2 |
D | 2 |
采樣點的布置:
除受潔凈區(qū)的設(shè)備限制外，取樣點應(yīng)在整個潔凈區(qū)均勻布置。
在日常監(jiān)控時，那些與產(chǎn)品相鄰近的區(qū)域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣及設(shè)備附近應(yīng)考慮增加取樣點和取樣次數(shù)(與產(chǎn)品非接觸區(qū)相比，這些區(qū)域應(yīng)視為關(guān)鍵區(qū)):人員活動頻繁或人員較集中的區(qū)域也應(yīng)視為關(guān)鍵區(qū)，需加強監(jiān)控。
取樣點一股布置在趾離地面0.8-1.0m之間或操作平臺的高度。
取樣時，取樣沒備會對氣流產(chǎn)生干擾，取樣時應(yīng)避免可能對氣流組織的干擾。
盡量避免在回風口附近取樣(距離lm以上)，且測試人員應(yīng)在取樣口的下風側(cè)，并盡量少走動。
4.3.4測試步驟：
4.3.4.1采樣方法:
用無菌容器(如不銹鋼儲槽)將預先培養(yǎng)的培養(yǎng)皿(無菌平皿)帶至待測區(qū)，將培養(yǎng)皿取出，放置在預先確定取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時，再將培養(yǎng)皿蓋上，蓋后倒置。檢測時記下培養(yǎng)皿打開的起始時間和結(jié)束時間。
4.3.4.2培養(yǎng)：
全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。32℃培養(yǎng)，時間為72小時。
每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定三個培養(yǎng)皿做對照培養(yǎng)。
4.3.4.3菌落計數(shù):
用肉眼直接計數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上計數(shù)。
4.3.5注意事項：
測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
采取一切措施防止人為對樣本的污染。
對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡鑒別。
采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
測試狀態(tài):
沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。
沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)己經(jīng)過消毒。
測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，在空調(diào)系統(tǒng)驗流時、長期停產(chǎn)恢復生產(chǎn)前、設(shè)施設(shè)備大修復產(chǎn)前進行靜態(tài)測試，在日常監(jiān)測時進行動態(tài)監(jiān)測。
測試人員:測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2個人。
結(jié)果計算:
用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
平均菌落數(shù)的汁算見下式:
計算公式：
M =（M1+M2+…+MN）/n
式中M為平均菌落數(shù)（CFU）
Mi表示1，2，3，……n號平皿菌落數(shù)；n表示平皿總數(shù)。
6．標準：
潔凈度級別 | 沉降菌平均菌落數(shù)（CFU/皿）以4h計 |
A | ＜1 |
B | 5 |
C | 50 |
D | 100 |
7.結(jié)果評定:
用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。
潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評定標準。
若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結(jié)果必須合格。
8.偏差糾正
一旦發(fā)現(xiàn)空氣微生物監(jiān)測結(jié)果超標，一般可以采取以下行動進行調(diào)查和評估:
GMP潔凈區(qū)沉降菌測試方法及測試記錄表
測試依據(jù) | GB/T16294-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室懸浮粒子的測試方法，衛(wèi)生部《中國生物制品規(guī)程》制定 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
測試狀態(tài) | □ 靜態(tài) □ 動態(tài) | 其他測試合格情況 | 溫濕度: 壓差: 換氣次數(shù): | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
操作方法 | 1、 采用平板暴露法： 靜態(tài)將姨酪大豆胨瓊脂平板（9cm直徑）要求及采樣點平面圖逐個放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表暴露30分鐘后，將培養(yǎng)基皿蓋上后倒置。 動態(tài)：將姨酪大豆胨瓊脂平板（9cm直徑）要求及采樣點平面圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中4h后，將培養(yǎng)基皿蓋上后倒置。 2、全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3、在30℃—35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48小時。 4、每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。每批選定3只培養(yǎng)基作空白對照培養(yǎng)。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
檢測點分布及編號 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
陽性對照室二更 | S1 | S2 | 陰性對照室二更 | S9 | S10 | 微生物限度室 | S17 | S18 | 陰性對照 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
陽性手消間 | S3 | S4 | 陰性手消間 | S11 | S12 | 微生物限度室工作臺 | S19 | S20 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
陽性對照室 | S5 | S6 | 無菌室 | S13 | S14 | 1# | 2# | 3# | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
生物安全柜 | S7 | S8 | 無菌室工作臺 | S15 | S16 |
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潔凈度級別 | D級 | C級 | B級 | A級 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
判定標準 | ≤100個/皿 | ≤50個/皿 | ≤5個/皿 | ≤1個/皿 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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結(jié)論 | 經(jīng)測試，潔凈區(qū)沉降菌測試結(jié)果： | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
檢驗 |
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| 復核 |
| 日期 |
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